Mikrobiologiske fremgangsmåter for undersøkelse av vann, jord og luft

Mikroorganismer - små, for det meste encellede skapninger, som er utbredt i naturen. De finnes i alle medium (luft, jord, vann) i mennesker og dyr, i planter.

Kvalitativ mangfold og antall organismer er i hovedsak avhengig ernæringsmessige forbindelser. Men det er også viktig som fuktighet, temperatur, lufting og virkning av sollys og andre faktorer.

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. Metoder for sanitær og mikrobiologiske undersøkelser naturlige media kan oppdage tilstedeværelsen av patogene bakterier, og for å bestemme deres beløp i samsvar med de oppnådde resultater, for å utvikle tiltak for å fjerne eller forhindre infeksiøse sykdommer. I tillegg er kvantitativ konto nødvendig for økosystemet modellering og utviklingen av de naturlige prosesser for styring. . La oss se nærmere hva er metoder for mikrobiologisk undersøkelse.

jord

Det regnes av forskere som en av de mulige ruter for overføring av smittsomme sykdommer. Med sekreter human eller animalsk pasient i jordgjennomtrengende patogener. Noen av dem, særlig spore, kan vedvare i jorden i lang tid (noen ganger i flere tiår). позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). Jord faller patogener slike farlige infeksjoner slik som stivkrampe, miltbrann, botulisme, osv. Metoder for sanitær-mikrobiologisk undersøkelse av jordsmonnet gjør det mulig å definere "mikrobiell telling" (antall mikroorganismer i jorden av et gram), og coli indeks (antall E. coli) .

Jord analyse: en oversikt

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. Metoder for mikrobiologisk undersøkelse av jordsmonnet bør først og fremst tilskrives direkte mikroskopi og kulturen på fast næringsmedium. Populasjoner av mikroorganismer og deres grupper som lever i jorden, er forskjellig på den taksonomiske status og økologiske funksjoner. I vitenskapen, de er forent under fellesbetegnelsen "jord biota." Primer - habitat stort antall mikroorganismer. I gram jord er til stede fra 1 til 10 milliarder sine celler. I dette miljøet, tar aktivt nedbrytning av organisk materiale, med deltakelse av forskjellige saprophytic mikroorganismer.

Mikroskopiske studier av mikrobiologisk metode: trinnene

Analyse av mediet begynner med prøvetaking. For dette formålet, tidligere skrelt og revet alkohol kniv (spade kan brukes). Etter at prøvepreparering. Det neste trinnet - telle celler farget utstryk. Vurdere hvert trinn for seg.

prøvetaking

Ved analyse av landbruksjord har en tendens prøve tatt fra en dybde av hele laget. Først fjernes 2-3 cm over gulvet, da det kan være til stede i en overflødig mikroflora. Deretter, med et areal på bakken studert ta monolitter. Lengden på hver av dem må være i samsvar med tykkelsen på laget som du ønsker å prøve.

På en tomt på 100-200 kvm. 7-10 m utvalgte prøver. Vekten av hver - av størrelsesorden 0,5 kg. Prøvene må blandes grundig i posen. Deretter tar gjennomsnittlig prøve veide omtrent 1 kg. Den skal plasseres i pergament (sterilt) pakke innesluttet i en stoff pose. Før direkte analyse av prøven oppbevares i kjøleskap.

Survey Forberedelse

Den omrørte jord helles på tørt glass. Sin pre-tørk med alkohol og brenne over brenneren. Med en slikkepott jord grundig blandet og utvidet jevnt. Det er obligatorisk å fjerne røtter og andre fremmedelementer. For å gjøre dette, bruker pinsett. Før bruk pinsett og spatel over brenneren antent og avkjøles.

Av de forskjellige jordflekkene fordelt på glasset, valgt små porsjoner. De veide i en porselensskål på et teknisk skala. является специальная обработка образца. Obligatorisk trinn mikroskopisk metode for mikrobiologiske undersøkelser er den spesielle behandlingen av prøven. 2 må være forberedt på forhånd, steril kolbe. Deres størrelse bør ikke overstige 250 ml. En av kolbene helles i 100 ml vann fra springen. Fordi det tar 0,4-0,8 ml flytende prøve av jord og fuktet til en pasta. Blandingen skal bli gnidd med en finger eller gummi støter i 5 minutter.

Vann fra den første kolben ble overført til jordmasse tom kolbe. Videre gni henne tilbake. Etter at denne massen blir overført til en kolbe i nærheten av brennerflammen. Container med jord Suspensjonen ble ristet på en ristemaskin i 5 min. Deretter ble den tillatt å sedimentere i ca. 30 sekunder. Dette er nødvendig for å tillate store partikler til å slå seg. Etter et halvt minutt masse anvendes for fremstilling av preparatene.

Legemer på faste flekker

, разработанному Виноградским. Direkte mikroskopisk undersøkelse av jordsmonnet blir utført ved fremgangsmåten ifølge mikrobiologiske undersøkelser, utviklet Vinogradskii. I bestemt volum av suspensjonen ble tellet antall celler av mikroorganismer. Studerer faste Flekker kan oppbevare medikamenter på lang sikt og utføre beregninger på ethvert tidspunkt.

Fremstilling av legemidlet som følger. En viss mengde av oppslemning (typisk 0.02-0.05 ml) blir påført med en mikropipette på objektglasset. Til denne løsning ble det tilsatt en dråpe av agar-agar (polysakkarid agaropektin blanding og agarose ekstrahert fra brunalger og rød sort Sea), omrørt raskt og spredt over et område 4-6 sq. cm. Pap lufttørket og fiksert i 20-30 minutter. alkohol (96%). Deretter ble legemidlet som er fuktet med destillert vann og plasseres i p-p-karbolsyre erythrosin 20-30 min.

Etter fargingen blir det vasket og tørket i luft. Celletall utføres fra nedsenking objektivet.

Såing på faste medier

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. Mikroskopiske metoder for mikrobiologisk undersøkelse kan oppdage et stort antall mikroorganismer. Men til tross for dette, metoden for er vaksinasjon den vanligste i praksis. Sin essens består i såing mengde av legemidlet (jord suspensjon) i en petriskål på et fast medium.

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Denne metoden for mikrobiologisk forskning tar hensyn ikke bare kvantitet, men også den gruppen, og i noen tilfeller, og artssammensetningen av de mikroskopiske flora. Telling av antall kolonier som produseres, vanligvis fra bunnen av petriskålen i transmittert lys. På den beregnede område plassert en markør eller blekk dot.

vann Analyse

Mikrofloraen i vannlegemet, som en regel, gjenspeiler den mikrobielle sammensetningen av jordsmonnet rundt den. имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. I denne sammenheng er fremgangsmåter for sanitær-mikrobiologisk analyse av vann og jord er av særlig praktisk betydning i studiet av tilstanden til en bestemt økosystem. Ferskvannet inneholder som regel cocci, stavformede bakterier.

Anaerobes i vann finnes i små mengder. Som regel multiplisere de på bunnen av vannlegemer, i slammet, tar del i prosessen med rensing. Mikrofloraen hav og sjøer med fordel representert halophytic (halofile bakterier).

I vann, vann brønner er praktisk talt uten mikroorganismer. Dette er på grunn av filtreringskapasiteten av jordlaget.

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. Konvensjonelle fremgangsmåter for mikrobiologisk forskning vann betraktet definisjonen av mikrobielle og coli-titer eller om-indeks. Den første indikatoren angir antall bakterier i 1 ml væske. Coli indeksen representerer antallet av koliforme bakterier som er tilstede i en liter vann, og hvis titer - den minimale antall eller maksimal fortynning væske i hvilken de kan likevel bli oppdaget.

Bestemmelse av mikrobiell antall

Denne metoden sanitærmikrobiologisk undersøkelse av vann er som følger. I 1 ml vann blir bestemt rekke mesofile og fakultative anaerobe bakterier (mellomliggende) aerober i stand til på kjøtt-pepton-agar (primær medium) ved 37 °. i løpet av dagen til å danne kolonier synlige ved en forstørrelse på 2-5 p. eller det blotte øye.

является посев. Nøkkeltrinnet i fremgangsmåten for mikrobiologisk analyse av vannet blir sådd. Fordi hver prøve blir sådd minst 2 forskjellige volumer. Når vann fra springen analyse i hver kopp er fremstilt av 1-0.1 ml ren væske og forurenset 0.01-0.001 ml. For inokulering av 0,1 ml eller mindre volum av fluid blir fortynnet med destillert (sterilt) vann. Konsekvent forberede desimal fortynninger. 1 ml av hver av dem er fremstilt i to petriskåler.

Avl fylt med næringsagar. Det må først smelter, og avkjøl til 45 grader. Etter omrøring blir det aktive medium igjen på et horisontalt underlag for størkning. Ved 37 grader. dyrkes i løpet av dagen. позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. Det anses fremgangsmåte for mikrobiologisk forskning vann tar hensyn til resultatene av disse retter der antallet kolonier i området fra 30 til 300.

luft

Det regnes som et transittområde for mikroorganismer. являются седиментация (оседание) и аспирация. De viktigste metodene for mikrobiologiske undersøkelser er luft sedimentering (sedimentering) og aspirasjon.

Mikroflora luft miljø er vilkårlig delt i variable og konstante. Den første gruppen omfatter gjær, kromogent cocci, sporebærende Bacillus coli og andre mikroorganismer som er resistente mot tørking, eksponering for lys. Representanter variabel mikroflora, som trenger inn i luften fra deres vanlige habitat, lang beholder sin vitalitet.

I luften i store byer mikroorganismer mye mer enn i luften miljøet i distriktene. Over hav, skog er svært få bakterier. Air rensing rette nedbør: snø og regn. Innendørs mikrober mye mer enn i åpne områder. Deres tall er økt i vinter i fravær av vanlig ventilasjon.

sedimente

считается простейшим. Denne metoden for mikrobiologisk forskning i mikrobiologi anses å være den enkleste. Den er basert på sedimentering av de små dråper og partikler på agaroverflaten i en åpen petriskål ved hjelp av gravitasjonen. sedimenteringsfremgangsmåten kan ikke nøyaktig fastslå antallet bakterier i luften. Faktum er at i en åpen skål for å fange den fine fraksjon av de støvpartikler og dråper av bakteriell ganske vanskelig. På overflaten holdes tilbake hovedsakelig store partikler.

Denne metoden brukes ikke for luft analyse. Dette miljø kjennetegnes ved store svingninger i hastigheten på luftstrømmen. Sedimentasjon kan imidlertid bli brukt i fravær av mer avanserte innretninger eller elektrisk kraftkilde.

Bestemmelse av antallet mikrobielle utført ved Omelyansky metode. I samsvar med dette, i 5 minutter på et areal på 100 kvadrat agar. cm legger en rekke bakterier som er til stede i 10 liter luft.

Bestill 535 "På samlingen av mikrobiologiske metoder for etterforskning"

Bakteriologisk analyse inntar en viktig plass i den komplekse kliniske og laboratoriemessige aktiviteter rettet mot diagnose, forebygging og behandling av forskjellige infeksjonssykdommer. Men studien av miljøet, de er ikke begrenset.

Av særlig betydning er den bakteriologiske analyser av biologisk materiale i sykehus. For forskning i helseinstitusjoner, økt krav. Formålet med Order "På samlingen av mikrobiologiske metoder for etterforskning" er å forbedre bakteriologisk analyse, forbedre kvaliteten og effektiviteten av mikrobiologiske diagnostikk.

Mikroskopisk undersøkelse av utstryk hos kvinner

Det er en viktig metode for analyse for diagnose av infeksjoner, seksuelt overførbare sykdommer, og opportunistiske infeksjoner (opportunistiske bakterier).

Mikroskopisk analyse for å vurdere den kvalitative og kvantitative sammensetning av mikroflora, kontrollere riktigheten av sampling. For eksempel kan nærværet av vaginalepitelet i vattpinner tatt fra halskanalen indikerer et brudd på reglene for utvelgelse av en biologisk prøve.

Det sies at mikrobiologisk undersøkelse i dette tilfellet er vanligvis etterfulgt av noen problemer. De er knyttet til det faktum at i den nedre kjønnsorgan normalt er tilstede en mangfoldig mikroflora som varierer ved ulike aldre. For å forbedre effektiviteten i forskning og har utviklet standardiserte regler.

Diagnose av virusinfeksjoner

Den utføres ved hjelp av metoder som detekterer RNA- og DNA-patogener. De er primært basert på bestemmelse av nukleotidsekvenser i patologisk materiale. For dette formål, de molekylære prober. De er kunstig fremstilte nukleinsyrer komplementære til (komplementære til) de virale syrer som er merket med en radioaktiv markør eller biotin.

Det særegne ved fremgangsmåten blir gjentatt kopiering av det spesifikke DNA-fragment som inneholdt noen få hundre (eller titalls) nukleotidpar. replikasjon (kopiering) er at utvidelsen kan begynne bare i enkelte enheter. primere (primere) som brukes til å lage dem. De syntetiserte oligonukleotider.

PCR-diagnostikk (polymerase chain reaction) er enkel i utførelse. Denne metoden gjør at du raskt får resultatet ved å bruke en liten mengde av patologisk materiale. Ved hjelp av PCR-diagnostikk identifiserer akutte, kroniske og latente (skjult) infeksjoner.

Når sensitiviteten av denne metoden er ansett som mer foretrukket. Men dagens testsystemer er ikke pålitelige nok, slik at PCR diagnose ikke fullt ut kan erstatte tradisjonelle metoder.