Serologiske tester: typer, bruk

Laboratoriediagnostisering av praktisk talt alle infeksjonssykdommer er basert på påvisning av blod i pasientens antistoffer som er produsert av patogen-antigenet, serologiske metoder. De gikk inn i medisinsk praksis i slutten av nittende - tidlig tjuende århundre.

Utviklingen av vitenskap har bidratt til å definere antigene strukturen av mikrober og kjemiske formler av sine giftstoffer. Det er mulig å skape ikke bare terapeutisk men også diagnostiske serum. De oppnås ved administrering, svekkede patogener forsøksdyr. Etter flere dager med å suge blod kaniner eller mus fremstilte produkter som brukes for identifisering av bakterier eller deres toksiner ved hjelp av serologiske tester.

Den ytre manifestasjon av denne reaksjon avhenger av betingelsene for dets formulering og tilstanden av antigener i pasientens blod. Dersom mikrobene er uløselige partikler, de avgjøre, lysert, immobilisert eller bundet i serum. Dersom antigenene er oppløselige, vises det fenomenet nøytralisering eller utfelling.

agglutinasjon (PA)

Serologisk agglutinasjonstest er svært spesifikk. Det er lett å utføre og er helt klart for raskt å påvise tilstedeværelse av antigener i pasientens serum. Den brukes for å sette Vidal reaksjon (diagnose av tyfus og para) og Weigl (tyfus).

Den er basert på en spesifikk interaksjon mellom humane antistoffer (eller agglutininer) og mikrobielle celler (agglyutenogenami). Etter deres vekselvirkning dannes partikler som felles ut. Dette er et positivt tegn. For å sette reaksjonen kan anvendes levende eller døde mikrobielle midler, sopp, protozoer blodceller og somatiske celler.

Kjemisk reaksjon er delt opp i to trinn:

1. Spesifikke antistoffer forbindelse (AT) med antigener (Ag).
2. Ikke-spesifikk - avsetning av konglomerater AG-AT, dvs. dannelsen av klistret.

Reaksjon indirekte agglutinasjon (TPHA)

Denne reaksjonen er mer følsom enn den forrige. Den brukes for diagnostisering av sykdommer forårsaket av bakterier, intracellulære parasitter, protozoer. Det er så spesifikk som kan påvise selv meget lave konsentrasjoner av antistoffer.

For formulering ved anvendelse av renset sau røde blodceller og røde blodceller av human forbehandlet med antistoffer eller antigener (det kommer an på hva lab ønsker å finne). I noen tilfeller, menneskelige røde blodceller behandlet med immunglobuliner. Serologisk respons av erytrocytter er ansett som gyldig dersom utfelling derav oppstått ved bunnen av røret. Den positive reaksjon kan vi si når cellene er arrangert i form av en omvendt paraply, opptar hele bunnen. Den negative reaksjonen blir avsluttet når de røde blodcellene slå seg ned i form av en kolonne eller knapper i sentrum av bunnen.

Utfellingsreaksjonen (RP)

Serologiske reaksjoner av denne type tjener til å identifisere ekstremt små partikler antigener. Dette kan være, for eksempel, proteiner (eller deler derav), kan forbindelser med proteiner med lipider eller karbohydrater, en del av bakteriene og deres toksiner.

Sera for reaksjonen oppnås ved kunstig infisering av dyr, typisk kaniner. I denne metoden, kan du få absolutt alle fellings serum. Staging serologisk utfelling lignende virkningsmekanisme på agglutinering. Antistoffene inneholdt i serumet binder til antigener i den kolloidale oppløsning for å danne store proteinmolekyler, som er avsatt på bunnen av røret, eller på substratet (gel). Denne metoden er ansett for å være svært spesifikk og kan påvise selv spormengder av stoffet.

Brukes til å diagnostisere pest, tularemi, miltbrann, hjernehinnebetennelse og andre sykdommer. Også involvert i rettsmedisinsk undersøkelse.

Gel utfelling test

Serologiske tester kan utføres ikke bare i et flytende medium, men i den agarosegel. Dette kalles diffus utfellingsmetoden. Med det studere sammensetning av komplekse antigeniske blandinger. Denne metoden er basert på kjemotaksen av antigener til antistoffer, og vice versa. Gelen de beveger seg mot hverandre ved ulike hastigheter og møte for å danne utfelling linjer. Hver linje - ett sett med K-AT.

Nøytralisering exotoxin antitoxin (RN)

Antitoksisk serum kan nøytralisere eksotoksin som mikroorganismer produserer. På grunnlag av denne informasjonen og serologiske tester. Microbiology bruker denne metoden for titrering av sera, toksiner og toksoider, så vel som deres terapeutisk aktivitet. Styrken av nøytraliseringen av toksinet bestemmes av de konvensjonelle enheter - AE.

Dessuten, på grunn av denne reaksjon kan bestemme arten eller typer som tilhører eksotoksin. Den brukes i diagnostisering av tetanus, difteri, botulisme. Undersøkelsen kan utføres "i glass", og i en gel.

lysis reaksjon (RL)

Den immunserum, som kommer inn i kroppen til pasienten, har, bortsett fra sin hovedfunksjon av passiv immunitet, selv og lytiske egenskaper. Det er i stand til å oppløse mikrobielle midler, cellulære og virusfremmedelementer kommer inn i kroppen til pasienten. Avhengig av spesifisiteten til antistoffene innebefattet i serum isolert bactericidin, cytolysins, spirohetoliziny, hemolysiner og andre.

Disse spesifikke antistoffene kalles "supplement". Det er funnet i nesten alle kroppsvæsker, den har en kompleks proteinstruktur og er meget følsom for temperaturøkning, ristet, syrer og direkte sollys. Men i tørket tilstand er i stand til å opprettholde sine lytiske egenskaper på inntil seks måneder.

Det er noen typer serologiske tester av denne typen:

- bacteriolysis;

- hemolyse.

Bacteriolysis utføres ved anvendelse av pasientens blodserum og spesifikk immunserum med levende bakterier. Hvis, da forskeren ser lysis av bakteriene, og responsen vil bli betraktet som et tilstrekkelig antall positive komplement er til stede i blodet.

Den andre blod serologisk respons er at suspensjonen av erytrocytter behandlede pasienter i serumholdig hemolysiner, som aktiveres kun i nærvær av en spesiell kompliment. Hvis det er en, så laboratoriet ser oppløsningen av røde blodceller. Denne reaksjonen blir mye brukt i moderne medisin for å bestemme titeren av komplement (dvs. den minste mengde vekklysering av røde blodceller) i blodserum og for fremstilling av komplement-bindingsanalyse. Det var på denne måten gjennomført serologisk reaksjon for syfilis - Wasserman.

komplementfiksering (RSK)

Denne reaksjonen blir brukt til å påvise serum antistoff til pasienten av et infeksiøst middel, så vel som for å identifisere opphavsmannen til dets antigene struktur.

Opp til dette punktet har vi beskrevet en enkel serologiske tester. RAC ansett vanskelig reaksjon, ettersom det samhandler ikke to, men tre elementer: et antistoff, et antigen og komplement. Essensen ligger i det faktum at interaksjonen mellom antistoffet og antigenet forekommer bare i nærvær av proteiner kompliment som adsorberes på overflaten av det dannede kompleks K-AT.

Selv-antigener etter tilsetning av komplement, gjenstand for betydelige endringer, som indikerer kvaliteten av reaksjonen. Dette kan være lyse, hemolyse, immobilisering, bakteriedrepende eller bakteriostatisk effekt.

Reaksjonen i seg selv finner sted i to faser:

1. Til dannelsen av antistoff-antigen, som ikke er visuelt merkbar forsker.
2. Endring av antigenet under påvirkning av komplement. Denne fasen vanligvis kan spores tilbake til det blotte øye. Hvis den visuelle respons ikke er synlig, og deretter bruke den ytterligere indikatorsystem som gjør det mulig å detektere endringer.

indikatorsystemet

Denne reaksjonen er basert på bindingen av komplement. Den reagensglass time etter innstilling av RSK tilsatt rensede saue-erytrocytter og serum hemolytisk ikke inneholder komplementet. Dersom røret var igjen ubundet komplement, vil det bli den komplekse N-AT dannet mellom saueblodceller og hemolysin, og forårsaker deres oppløsning. Dette ville bety at DGC er negativ. Hvis røde blodceller forble intakt, da følgelig er reaksjons positiv.

hemagglutinasjon (RHA)

Det er to fundamentalt forskjellige hemagglutination. En av dem - serologisk, er det brukt for å bestemme blodgrupper. I dette tilfellet erytrocytter samhandle med antistoffer.

Og den andre reaksjonen er ikke relatert til serologisk, ettersom røde blodlegemer reagerer med hemagglutinin produsert av virus. Siden hver vibratoren fungerer bare på bestemte erytrocytter (kylling, sau, ape), kan vi anta denne reaksjonen snevert bestemt.

Klar positiv eller negativ respons, er det mulig for plasseringen av blodcellene i bunnen av røret. Hvis de figuren ligner en omvendt paraply, deretter det ønskede virus er tilstede i pasientens blod. Og hvis alle de røde blodcellene dannet som en mynt kolonner, er det ingen ukjente patogener.

Omsetning av hemagglutineringshemming (HAI)

Denne svært spesifikk reaksjon, noe som gjør det mulig å etablere form, type virus eller tilstedeværelse av spesifikke antistoffer i serum fra pasientens blod.

Essensen ligger i det faktum at antistoffene som er tilsatt til røret som inneholdt testmaterialet, hindrer avsetning av antigener på erytrocytter, og dermed stoppe hemagglutinasjon. Dette er en kvalitativ indikasjon på nærværet av spesifikke antigener i blodet til en spesielt ønsket virus.

Reaksjons immunfluorescens (RIF)

Reaksjonen er basert på evnen til å identifisere kompleks med AT-AH fluorescens mikroskopi etter behandling flyuorohromnymi fargestoffer. Denne metoden er enkel å bruke, krever ikke isolering av ren kultur og tar lite tid. Det er uunnværlig for hurtig diagnose av infeksjonssykdommer.

I praksis er disse serologiske tester delt inn i to kategorier: direkte og indirekte.

Direkte RIF produsert antigen som tidligere er behandlet fluoriserende serum. Og Indirekte er at stoffet først behandles med konvensjonelle diagnosticum som omfatter antistoffer mot det ønskede antigenet og deretter satt på igjen fluorescerende myse, som er spesifikke for proteinene av komplekset K-AT, og mikrobielle celler blir synlig ved mikroskopi.